پیپتینگ نمونه های با حجم کم

اگر تا به حال با پیپتینگ نمونه های با حجم کم مانند حجم هایی که برای پلیت های 96 یا 384 خانه مورد نیاز است سر و کار داشته اید، قطعاً با سختی های آن آشنا هستید. علاوه بر دقت به میزان حجم برداشته شده یا ریخته شده، باید حواس تان به معرف ها، ردیف چاهک ها، حباب ها و … باشد که می تواند کار را سخت تر کند. برخی از سنجش ها می توانند به خطاهای حجمی، اختلاط ناکافی، تبخیر یا وجود حباب در چاهک ها بسیار حساس باشند. نادیده گرفتن هر یک از این عوامل می تواند اثرات محسوسی را بر نتایج تست شما داشته باشد و احتمالاً در این زمینه نیز شما سهم خطای پیپتینگ را در نظر نمیگیرید. اگر این سناریو برای شما آشناست، باید با روش هایی آشنا شوید که تکنیک پیپتینگ شما را در کار با نمونه های با حجم کم بهبود بخشد و همچنین سنجش موفقیت آمیز و نتایج ثابت شما را تضمین کند.

دقت، صحت و تکرارپذیری مسائلی هستند که در تکنیک های پیپتینگ خوب باید در نظر گرفته شود و در این زمینه پیپتاژ حجم های کوچک چالش زا است. در اینجا نکات مهمی که برای بهینه سازی روش پیپتینگ و بهبود پیپتینگ با حجم های کم مورد نیاز است مورد بررسی قرار می گیرد.

هنگام پیپت کردن حجم های 0.2 تا 5 میکرولیتر، صحت و دقت بسیار اهمیت پیدا می کند، زیر تاثیر اشتباهات رایج در پیپتینگ معمولی، بر حجم های پایین بیشتر و آشکارتر است. در اینجا باید از تکنیک های درست پیپتینگ به نحو احسن استفاده کرد. همچنین، از آنجایی که تمرکز بیشتری روی کاهش معرف‌ها و هزینه‌ها می‌شود، حجم‌های کوچک‌تر تقاضای بالاتری را در بازار دارند، به عنوان مثال، برای آماده‌سازی PCR Mastermix  یا واکنش‌های آنزیمی. به این منظور رعایت نکات زیر ضروری است:

• اتصال سرسمپلر: برای اتصال سرسمپلر به میکروپیپت، به آن ضربه وارد نکنید. اینکار ممکن است به انتهای سرسمپلر آسیب برساند و باعث تغییر جهت خروج مایع یا آسیب رساندن به دهانه سرسمپلر شود. هنگام اتصال سرسمپلر، از فشار کم استفاده کنید.
• نگه داشتن میکروپیپت در دست: در زمان انتظار برای سانتریفیوژ و غیره، میکروپیپت را در دست خود نگه ندارید. اینکار باعث گرم شدن داخل میکروپیپت شده و بالشتک هوا را به سمت انبساط سوق می دهد و در نتیجه هنگام پیپت کردن، از حجم تنظیم شده انحراف پیدا می کند.
• مرطوب کردن سرسمپلر: مرطوب کردن هوای داخل سرسمپلر و میکروپیپت، سرسمپلر را برای نمونه برداری آماده می کند و هنگام آسپیراسیون، از تبخیر و در نتیجه انحراف از حجم جلوگیری می کند.
• آسپیراسیون عمودی: رعایت این موضوع ، هنگام کار با حجم های کوچک بسیار مهم است تا از اثر مویینگی که هنگام نگه داشتن میکروپیپت در یک زاویه خاص رخ می دهد جلوگیری شود.

• عمق غوطه وری: برای جلوگیری از ورود مایع به سرسمپلر به دلیل اثر مویینگی، سرسمپلر را تا حد امکان کمتر در محلول غوطه ور سازید. قاعده کلی این است که هر چه سرسمپلر و حجم آن کوچکتر باشد، عمق غوطه وری کمتر می شود. هنگام پیپت کردن حجم های کوچک، حداکثر عمق غوطه وری 2 میلی متری توصیه می شود.

•  ریختن مایع در زاویه 45 درجه: هنگامی که میکروپیپت در زاویه 45 درجه نگه داشته شود، جریان بهینه مایع تضمین می شود.

• تماس با دیواره ظرف یا سطح مایع: حجم های کوچک را تنها زمانی می توان به درستی توزیع کرد که سرسمپلر در دیواره ظرف قرار گیرد و یا در مایع غوطه ور شود. با این روش، حتی آخرین قطره درون سرسمپلر را می توان با دقت خارج کرد.

• عملکرد دمیدن: پس از توزیع حجم های کم برای تخلیه آخرین قطره مایع موجود در سرسمپلر، عملکرد دمیدن اجباری است. دمیدن باید در هنگام تماس سرسمپلر با دیواره ظرف انجام شود. هنگام دمیدن در سطح مایع مراقب باشید که حباب های هوا به داخل نمونه وارد نشود.

منبع

https://handling-solutions.eppendorf.com/liquid-handling/pipetting-facts/small-volumes/