تاثیر سرعت و زمان بندی در پیپتینگ

در این مبحث، بر روی اشتباه رایجی که افراد زیادی در کار با پیپتینگ با آن مواجه هستند توضیحاتی ارایه می شود.پیپتینگ با سرعت بالا، با سرعت آهسته، یا عدم مکث به مدت مناسب پس از آسپیراسیون یا بعبارت دیگر پیپتینگ بدون زمان بندی، بر دقت و صحت می تواند تأثیر بگذارد. بیشترین نوع مشکلاتی که در بین کاربران سمپلر دیده می شود همین مسئله سرعت و زمان بندی پیپتینگ است: بیشتر افراد عمل پیپتینگ را با سرعت بالا انجام داده و پس از آسپیراسیون به اندازه کافی مکث نمی کنند. در بین افراد مختلف، مکث بعد از آسپیراسیون عموما بین 0.25 تا 0.33 ثانیه طول می کشد، در حالی که تحقیقات،  مدت زمان 1 ثانیه را  بعنوان بهینه ترین زمان به این منظور معرفی می کنند. گاهی اوقات بار کاری زیاد و تمایل به کارآمدی مناسب، باعث می شود که بسیاری از ما بدون اینکه متوجه تاثیر عواقب ( عدم دقت نسبی بیشتر  (RI) و ضرایب تغییرات بالاتر  (CV)) آن باشیم، کار خود را با عجله انجام دهیم که اینکار در نهایت منجر به کسب نتایجی با کیفیت پایین‌تر می‌شود.

چه چیزی در پشت “تله سرعت” نهفته است؟

آنچه که در تله سرعت مطرح است، مسئله حرکت مایع به داخل سرسمپلر می باشد. هنگامی که پیپتینگ انجام می دهید، ابتدا پیستون را فشار می‌دهید، نوک سرسمپلر را در نمونه فرو می‌برید و سپس پیستون را رها می‌کنید که باعث می‌شود مایع وارد سرسمپلر شود، زیرا پیستون به موقعیت اصلی خود برمی‌گردد. اما حرکت مایع به داخل سرسمپلر آنی نیست، به این دلیل که کشش سطحی وجود دارد که باید قبل از ورود مایع به سرسمپلر بر آن غلبه کرد. علاوه بر این، اصطکاک بین مایع و سرسمپلر می تواند حرکت رو به بالای مایع را کاهش دهد. این بدان معنی است که هنگامی که پیستون به موقعیت اصلی خود باز می گردد، مایع معمولاً حرکت به سمت سرسمپلر را تمام نکرده است. بنابراین، اگر سرسمپلر را بعد از آسپیراسیون خیلی سریع از مایع خارج کنید، در نهایت حجم کمتری از آنچه مد نظرتان بوده است وارد سرسمپلر شده است.

مطالعه ای بر روی زمان مکث پس از آسپیراسیون انجام شده و به این منظور زمان 1 ثانیه بعنوان زمان بهینه مکث بعد از آسپیراسیون ( یا قبل از خالی کردن سرسمپلر) پیشنهاد شده است. جالب اینجاست که هم در صورتیکه به اندازه کافی مکث نکنید (0 ثانیه) و هم در صورتیکه بیش از حد طولانی مکث کنید (5 ثانیه) در نهایت با حجم کمتری مواجه خواهید شد. برای مدت زمان مکث طولانی، احتمالا مشکل این است که تبخیر مایع داخل سرسمپلر باعث انبساط حجم هوا می شود که به آرامی مایع را از سرسمپلر به عقب می راند.

هنگامی که سرعت رها کردن و فشار دادن پیستون در حین آسپیراسیون یا توزیع، یکنواخت، منظم یا با سرعت مناسب نباشد، نیروهای مشابه احتمالاً در عدم دقت و صحت نقش دارند. بنابراین، برای کیفیت بهتر داده ها، به جزئیات پیپتینگ، مانند سرعت و مکث قبل از خارج کردن سرسمپلر از مایع باید توجه کافی داشت.

منبع

 Candie Gilman, Pause & Effect: How timing is critical for good pipetting technique, Artel https://www.artel.co/pause-effect-how-timing-is-critical-for-good-pipetting-technique/